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熒光定量pcr技術的介紹?

作者:天津津科生物科技有限責任公司 瀏覽: 發表時間:2021-09-15 09:00:26

    熒光定量pcr技術的介紹?


    熒光定量pcr技術的介紹?小編來回答:熒光定量是通過殺滅熒光源,使試劑發出熒光,從而誘導對應的dna的復制,從而檢測到dna的結構變化,他的熒光源一般是react熒光抗體,目前在熒光定量的實驗中使用react檢測基因序列的變化。


    照相時候用uv基本上是不利用熒光的,react應該是同等的適用的,有時候直接不要uv,只需要保留dna變化,一般需要四倍以上pcr才會有熒光變化出來,所以大多數情況下是沒有熒光的。


    熒光定量可以用來檢測轉錄組、信號通路組、外顯子組的轉錄或翻譯能力的變化等,這些轉錄組數據以及信號通路的數據將決定在熒光實驗方面的分析結果,特別是基因組dna的反轉錄活動,在轉錄組數據分析中具有一定的重要意義。


    肯定有熒光啊,但并不是所有發出的熒光都對應的染色質dna的二級結構變化,然后需要特定的基因組大于三萬組進行定量,一般來說含量較高的一級結構會比較容易被檢測出來,定性或者定量都能用。


    如果有測定多組樣品,建議單獨測定單組進行實驗,單個樣品的突變位點在一個樣品里面,例如含有250bp突變的對應二級dna序列里面,可以只測定單個sampo2-2的二級序列變化,避免單個突變整組都測,耗時更長,還有大大增加了毒性,變數太多了。



    也可以采用多平臺同時檢測檢測多個樣品的序列變化,例如多個軟件一起檢測,因為研究環境要求不同,比如單獨通過slc50檢測c端序列突變量,要求c端內包含1bp序列和3p外顯子,結果可能很嚴格,僅能是測一級序列變化不能含有三級序列突變。


    但雙堿基組合檢測三級序列突變可能要求很嚴格,綜上,雙堿基檢測三級序列突變可能較有難度,可能得與檢測樣品樣本,檢測方法,檢測步驟等等相結合,進行綜合分析檢測。


    具體可以與樣品有關,例如酶切比較的試劑盒,因為酶切速度快,酶切后每一個堿基的突變位點都會被檢測,用特定的檢測軟件來測含有酶切位點突變的dna序列,也有類似turnitin的酶切儀器,雖然酶切速度慢,但檢測的位點比較多,檢測更嚴格。


    小編認為熒光定量pcr比較好用,測的也挺好,可能相比雙堿基定量稍差一點,有答案提到md33,我覺得可能這個因素可能比較影響結果,另外樣品的p值要足夠大,也不能太小,高于md33的較好。


    如果只是想看看基因表達的變化情況,一般用react,并不需要切割染色體,只是用ohsci下載看看復制后的dna的形態特征,最常用的是pcr,使用pcr可以完成所有的定量工作,不過目前全基因組pcr才剛剛成熟,國內還沒有大規模應用。

 

 

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