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透射電鏡TEM

技術介紹

透射電鏡(TEM)利用電子束作光源,用電磁場作透鏡,經加速和聚集的電子束投射到非常薄的樣品上,形成明暗不同的影像,TEM在中和物理學和生物學相關的許多科學領域都是重要的分析方法,如基礎醫學研究、病毒學、材料科學、以及納米技術、半導體研究等等。透射電子顯微鏡的分辨率比光學顯微鏡高的很多,分辨力可達0.2nm,200-200k倍之間連續可調; 可以用于觀察樣品的精細結構,甚至可以用于觀察僅僅一列分子的結構。


實驗流程

包埋-制片-拍照


案例:實驗結果展示

透射電鏡觀察細胞連接

    

送樣運輸要求

以下所有樣本必須盡量新鮮,固定液或懸浮液都不得冷凍結冰!

  1、動物組織樣本

  ①1-3min內取樣,取樣組織2mmX2mm大小,盡量薄。如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。超出此范圍后組織會無法完全固定,后續實驗無法完成,務必請重視此過程

  ②取材時盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質;觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚,腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進行固定)。

  ③取材時一定注意避免鑷子擠壓等機械損傷,刀片要鋒利避免挫傷組織。

  ④組織取下后立即投入電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。4°時樣本可保存1個月左右

  2、植物組織樣本

  ①取材要求同動物組織樣本。

  ②組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內,組織不能漂浮在固定液表面。

  3、細胞樣本

  貼壁細胞:

  ①培養好的細胞棄培養基,加入2.5%的常溫戊二醛固定液。

  ②常溫固定5min左右,用細胞刮(或軟橡膠蓋切得平整小方塊)沿一個方向輕輕刮下細胞,切記不要反復刮,避免細胞刮破。

  ③用巴氏吸管把細胞液吸入離心管內,放入離心機(不超過3000轉),離心2min左右,細胞團要有綠豆大小。

  ④棄固定液后加新的電鏡固定液,把細胞團輕輕挑起,懸浮于固定液中。

  ⑥室溫避光固定30min,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。

  4、細菌樣本

  長于固體培養基的細菌:連帶著培養基一起挑下細菌放于電鏡固定液內室溫固定2h,再轉移至4°保存, 4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。

  懸浮細菌孢子等:離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀綠豆大小,棄培養基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉移至4°保存,4°冰袋運輸,在保存和運輸過程中固定液切勿冷凍結冰。

  5、病毒

  破碎組織細胞,粗離心去除細胞碎片取上清,超速離心分離出病毒(病毒提取的過程需要客戶自己完成)。用緩沖液(如PBS)懸浮病毒,遠距離-80°凍存運輸,近距離4°保存運輸,盡快滴片做負染后及時電鏡觀察拍照。

  6、外秘體囊泡等

  客戶自己完成外秘體囊泡等的提取收集,用緩沖液(如PBS)或者試劑盒中的保存液懸浮,遠距離-80°凍存運輸,近距離4°保存運輸,盡快制片做負染后及時電鏡觀察拍照。(因此類樣品極易降解,樣品越新鮮越好,***數小時內完成滴片負染,否則做出的效果很不理想甚至完全觀察不到)

  7、納米材料等無機材料

  直接準備粉劑或用緩沖液(如PBS)懸浮,常溫保存運輸即可(需要超聲的備注)。做負染后電鏡觀察拍照。


注意事項

1.拍照需要求簡潔清楚,有側重點。需附參考圖或參考文獻(如有特殊要求請提前備注說明)

2.拍照倍數由參考文獻效果圖來確定(不同機器不同廠家倍數標準不同,不能互通參考)

3.圖片本身左下角附有拍照倍數(X-K 單位千倍),右下角附有標尺(十格總長即為標尺所注長度)

 


透射電鏡TEM
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